冷凍精子的操作流程
原標題：冷凍精子的操作程序
冷凍精子的操作過程
1、精子的收集
在禁欲期（通常3至5天）后，通過手動手動在10-20mL無菌聚丙烯樣品收集容器中收集精子。需要禁欲期以通過冷凍保存更好地保存樣品。一般來說，這種精子與收集前的禁欲期相比較。
在禁欲期（通常3至5天）后，通過手動手動在10-20mL無菌聚丙烯樣品收集容器中收集精子。需要禁欲期以通過冷凍保存更好地保存樣品。一般來說，這種精子在冷凍保存后比精子更穩定，更完整，而精子在收集前具有較短和不規則的禁欲。
注射的精液是液體，但在正常條件下立即凝結成凝膠。凝結的精液通常在30分鐘內液化，此時可以確定其體積。為了獲得精子的最大冰凍活力，液體精子應在收集精液后1分鐘內冷凍保存。
2、體積的測量
體積可以用類似的涂藥器或帶針的5mL注射器測量，有時可以根據精液收集前后樣品瓶重量之間的差異來計算。取0.1~0.2mL精液進行精液分析（精子百分比及其質量，精子密度等，參見本書相關章節），除需要服用一些精液外，同時用于篩選檢測某些性傳播疾病，進行某些測試以篩查導致性傳播疾病的微生物，如淋病奈瑟菌（詳見相關章節）。
3、甘油化
甘油用作冷凍保護劑，并且可以以逐步方式直接添加到未處理的精液中。每次添加后混合，時間間隔為1分鐘;或間接作為擴張液或基液的組分，并在稀釋后逐漸加入精液。在美國和加拿大，超過40％的著名精子庫仍僅使用甘油作為冷凍保護劑，并且越來越多的新精子庫使用擴張器，尤其是含甘油的兩性離子緩沖系統。
甘油化的條件不一定涉及特殊的溫度條件（室溫除外）和接觸時間（加入甘油和混合物所需的時間除外）。
4、包裝和存活力觀察
甘油精液可以用塑料移液管吸入（可用密封劑密封，加熱或用尼龍塞密封）或放入玻璃安瓿（用火焰密封）或置于塑料冷凍管（冷凍小瓶）中并用一個螺帽。每個冷凍精液的體積通常為0.4至0.8 mL，可用作人工授精的單位。當然，如果合適的話，人工授精也可以使用一個以上的精液單位，選擇一個用于冷凍保存精子的容器是很重要的。這種容器應易于標記，處理和儲存，并且具有良好的生物相容性和抗壓性。高質量的聚丙烯吸管或小瓶似乎最符合這些標準，沒有玻璃容器的缺點，例如易碎和污染的洗滌劑。
除了在液氮中冷凍之前需要分配冷凍和儲存的精子之外，還需要質量控制測試樣品。對于收集后未經處理的精液，用冷凍保護劑處理的精液，儲存前和冷凍和解凍后的精液，應觀察活性精子及其活性。通過觀察，我們可以追蹤冷凍保存每個階段的精子存活率，并確保冷凍精子的存活。
5、冷凍
當冷凍儲存時，吸管和安瓿中的精液可以分散或儲存成組，并且位置保持垂直，水平或傾斜。它通常置于液氮霧中，有時置于機械（電子）冷凍機的冷凍室中。冷卻和冷凍過程可以手動或以靜態或逐步方式完成，或通過計算機控制的液氮供應系統完成。最常見的是，操作者利用液氮儲存容器中的氣相進行直接，一次或逐漸冷凍。具有吸附液氮的石棉襯里的生物干燥輸送機也可以在氣相中用于冷凍，然后轉移到液相的儲存容器中。
6、儲存
分配的樣品應儲存在液氮中的金屬容器中，這些容器應放在合適的液氮冷凍機中。用于監測液氮水平的裝置[機械和/或電子]是用于監測水平水平的常用機械（手動）方法，以防止精子功能喪失，以便在液氮溫度以上長期儲存（-196） C）。當將定標柱塞垂直插入液氮底部時，在其上形成霜線以指示液氮水平。至于各種復雜的本地和遠程電子報警系統，現在有許多國家可供使用。所有這些都在市場上有售。另一方面，使用閃光燈定期目視檢查少量精子庫。 AATB組織庫標準僅需要有效的監測程序以確保樣品始終儲存在液氮表面下方。冷凍生物學家和相關研究人員通過熔化儲存前樣品和測試，發現在冷凍初期有一些精子活力喪失。然而，儲存在液氮表面下-196℃的冷凍精子沒有進一步的活性損失。已經證實，治療前癌癥患者精液的精子存活率通常較差（解凍后精子活力的百分比降低）但是，這種降低的運動能力在長期儲存期間不會進一步降低。
在接受調查的42個AATB成員的組織庫中，只有兩個報告了精液[由正常供體和/或治療前患者提供]，用于長期保存期間精子活力喪失的例子。據報道，只有1例精子活力喪失3年后的低溫保存。可以接受的是，在冷凍之前不能準確地確定儲存期間精子活力的喪失，或者更可能是由于未能確保最佳儲存條件。
7、解凍
冷凍精液可以通過將含有冷凍精子的包裝暴露在空氣或水中而恢復到液態。通常暴露在室溫下，但也可能暴露在其他溫度下，這取決于每個精子庫設計的方法。
8、分發
如果臨床醫生需要凍結精子進行試管嬰兒-ET，精子庫應按要求送到醫院（或）診所。冷凍的精子應從精子庫的儲存柜中取出，放入裝有液氮或固體二氧化碳（干冰）的特殊裝運箱中.
。然而，如果精子庫在醫院并且非常靠近手術室，則它可以不放置在上述特殊運輸箱中，而是可以直接送到手術室供醫生使用。臨床使用前冷凍精子的融化有助于通過質量控制重新評估精子存活率。
